Projetos Associados


1. Projeto: Avaliação do perfil de metilação como marcador molecular para o diagnóstico precoce de recidivas em pacientes com tumores de cabeça e pescoço”.


André Luiz Vettore de Oliveira – UNIFESP
FAPESP–2008/58460-9 – R$271.292,36 / US$25.406,00
01/05/2009 a 30/04/2011
verificar se a presença de metilação aberrante em amostras de saliva de pacientes portadores de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECP) pode ser uma ferramenta útil para a detecção precoce de recidivas tumorais.
Analisar amostras de saliva coletadas em 4 consultas semestrais de acompanhamento de 180 casos consecutivos de CECP e determinar o perfil de hipermetilação de um painel de genes nestas amostras através da técnica de qMSP (quantitative Methylation-Specific PCR).
Verificar a freqüência de hipermetilação de um painel de genes supressores de tumor em amostras de saliva colhidas nas consultas semestrais de acompanhamento e correlacionar estes dados moleculares com as características clínicas dos pacientes. Assim, se poderá avaliar se este método pouco invasivo, simples e econômico de diagnóstico pode ser útil para a detecção precoce de recidivas tumorais.
A análise do padrão de metilação aberrante de 17 genes em amostras de saliva de pacientes com CECP, identificou um painel de 5 genes com especificidade de 95% e sensibilidade de 38% para a detecção da presença de células tumorais na saliva.


2. Projeto: Avaliação da função e da histopatologia pulmonar em modelo experimental de redução da função colinérgica em camundongos geneticamente modificados.


Carla Máximo Prado - UNIFESP
FAPESP– 2008/55359-5 – R$81.108,45 / US$69.147,30
01/05/2009 a 30/04/2013
Avaliar os efeitos da hipofunção colinérgica por redução da proteína transportadora vesicular de acetilcolina na mecânica e na histopatologia pulmonar em modelos experimentais de inflamação pulmonar crônica.
Animais geneticamente modificados para menor expressão de proteína vesicular transportadora de acetilcolina serão submetidos ao protocolo crônico de sensibilização com ovoalbumina, de enfisema ou receberão material particulado intranasal e a função pulmonar será avaliada por meio do ventilador mecânico (curva dose resposta à metacolina) e a histopatologia pulmonar. Serão quantificados remodelamento, inflamação pulmonar e possíveis mecanismos envolvidos como expressão de nNOS, iNOS, isoprostano e citocinas.
Considerando os aspectos anti-inflamatórios que envolvem o sistema colinérgico, espera-se que os animais com redução da função colinérgica apresentem piora nos parâmetros pulmonares funcionais e histopatológicos analisados.


3. Projeto: Estudos De Expressão Gênica Em Mieloma Múltiplo: Identificação De Marcadores Tumorais E Possíveis Alvos Terapêuticos.


Gisele Wally Braga Colleoni - UNIFESP
FAPESP – 04/13213-3 - R$94.000,00 e US$47.500,00
01/01/2005 a 31/12/2007
Avaliar a expressão global de antígenos câncer/testículo (CT) em Mieloma Múltiplo (MM) para identificar possíveis marcadores prognósticos e alvos terapêuticos.
A expressão de 13 CTs foi estudada por RT-PCR em 15 amostras de medula óssea (MO) normais e em 39 amostras de MO de MM. Três amostras de CTs predominantemente positivos (> 6) e três amostras com expressão predominantemente negativa (0 ou 1) foram submetidas à análise de microarray e os resultados obtidos foram validados por PCR em tempo real.
A freqüência dos CTs em amostras de MO de pacientes com MM foi: CT7 77%, LAGE-1 49%, MAGEA3/6 41%, MAGEA2 36%, GAGE family 33%, NY-ESO-1 33%, BAGE-1 28%, MAGEA1 26%, PRAME 23%, SSX-1 26%, MAGEA12 20.5%, MAGEA4 e MAGEA10 0%. A positividade da família GAGE e o número de CTs positivos > 6 são fatores prognósticos desfavoráveis independentes para a sobrevida global (SG). A expressão de CT7 é fator prognóstico desfavorável para a SG quando apenas os pacientes não transplantados foram analisados. A análise de microarray identificou 147 genes diferencialmente expressos. A validação mostrou que o gene ITGA5 esta hipoexpresso (p= 0.0030).


4. Projeto: Regulação da expressão da BMP-9 em animais suplementados cronicamente com diferentes doses de L-arginina.


Luciana Chagas Caperuto - UNIFESP
FAPESP - 2009/50041-0 - R$77.049,45 e US$20.807,04
01/06/2009 a 31/05/2011
Avaliar a expressão da BMP-9 em animais suplementados com L‑arginina nas doses de 35, 70 e 140 mg cronicamente.
Os animais serão suplementados por 30 dias com 35, 70 e 140 mg de L-arginina. Serão avaliados: expressão gênica (PCR em tempo real), expressão protéica (Western Blotting), regulação pós-transcricional (PAT-Assay) e dosagens dos níveis séricos de insulina, corticosterona, GH e óxido nítrico. Será também realizada a avaliação do metabolismo glicêmico através do teste de tolerância à insulina (ITT).
Os animais suplementados com 35, 70 ou 140 mg de L arginina tornam-se resistentes à insulina e a expressão protéica do grupo suplementado com 140 mg apresenta-se aumentada, sem alteração na expressão protéica do grupo suplementado com 35 e 70 mg, o que sugere um efeito dependente da dose. A seguir, será avaliado a estabilidade do mRNA da BMP-9, já que a expressão gênica não apresenta alterações no modelo suplementado com 140 mg, enquanto a expressão protéica aumenta significativamente.


5. Projeto: Alterações celulares e moleculares induzidas pelo estresse térmico em oócitos Bos indicus e Bos taurus.


Fabíola Freitas de Paula Lopes - UNIFESP
FAPESP 2007/53323-0 -R$352.766,55 / US$62.969,35
01/12/2007 a 30/11/2011
Determinar o efeito de raças, estresse térmico (ET) e do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-I) na competência de oócitos bovinos, na expressão gênica diferencial em oócitos e caracterizar alterações oocitárias induzidas pelo ET e o papel do IGF-I.
Animais de diferentes raças serão submetidos aos tratamentos estresse térmico ou termoneutralidade, os complexos cumulus-oócito serão coletados e serão avaliadas a competência oocitária, a qualidade embrionária (microscopia confocal) e a expressão gênica diferencial (microarray genômico). Oócitos serão distribuídos nos grupos controle e estresse térmico na presença de 0 ou 100 ng/ml de IGF-I e se avaliará os efeitos dos tratamentos no citoesqueleto, na indução de apoptose e no desenvolvimento embrionário.
A exposição de oócitos bovinos ao ET reduziu o desenvolvimento embrionário subseqüente e causou indução de apoptose. Os danos celulares induzidos pelo estresse térmico de oócitos bovinos foram minimizados pelo IGF-I.

6. Projeto: Genoma Funcional do Cancro Cítrico: Estudo de Interações Patógeno-Planta.


Julio Cezar Franco de Oliveira - UNIFESP
FAPESP – 04/02006-7 - R$396,695,00 / US$28.815,00
01/08/2004 a 15/12/2010
Estudo da expressão gênica em larga escala de isolados da Xanthomonas axonopodis v. citri (Xac) com diferenças de patogenicidade e virulência, bem como de mutantes da Xac comprometidos na capacidade de atacar plantas cítricas hospedeiras.
Linhagens selvagens e mutantes da bactéria Xac, causadora do cancro cítrico, bem como isolados com patogenicidade alterada ou nula, serão crescidas em meios de cultura não-indutor ou indutor dos processos de patogenicidade e virulência. Após o isolamento dos RNAs, experimentos de microarray contendo o genoma da Xac serão realizados. Os resultados serão validados por RT-PCR.
Nosso grupo já vem trabalhando com expressão gênica em Xac, e a possibilidade de contar com esta plataforma multiusuário nos permitirá ampliar e aprofundar estudos, na UNIFESP-Diadema, sobre expressão de genes de patogenicidade e virulência, porém em larga escala pela tecnologia de microarray, comparando diferentes linhagens e condições capazes de induzir ou não o arsenal de ataque da bactéria fitopatogênica a seus hospedeiros cítricos.

7. Projeto: Cryptococcus neoformans: Estudos da via de transdução de sinal que controla o crescimento à 37ºC empregando ferramentas de biologia molecular.


Marcelo Afonso Vallim - UNIFESP
FAPESP – 2007/50536-3 - R$253.113,71/ US$50.558,56
05/ 2008 a 05/2012
O objetivo desta proposta é a caracterização dos transformantes ARF guanyl-nucleotide exchage factor, Thimidilate, AGC/AKT protein kinase, Dihidrooratase e Succinato que tiveram a sua capacidade de crescer a 37ºC alterada, e sua relação com outros genes envolvidos no crescimento a alta temperatura empregando técnicas de microarranjo, confirmando posteriormente o padrão de transcrição destes genes por PCR em tempo real.
Empregando a técnica de overlapping PCR os genes serão deletados do genoma de C. neoformans linhagem selvagem KN99α e empregando a técnica de bombardeamento o gene de resistência a neomicina será usado para substituir a ORF (open reading frame) do gene alvo. As lâminas de microarranjo serão hibridizadas com o cDNA marcado extraído da linhagem selvagem (KN99) e dos mutantes, obtidos a partir de culturas crescidas a 30°C e 37°C.
A capacidade do fungo C. neoformans crescer a 37°C é uma característica importante para a determinação da patogênese em pacientes imunocomprometidos. Já foi demonstrada a habilidade deste fungo crescer na temperatura fisiológica de mamíferos por uma via de transdução de sinal governada pela proteína RAS1, ampliar esse conhecimento é importante, pois dentro desta via é possível encontrar alvos para novas drogas antifúngicas. Portanto, explorar os mutantes desta via é importante para abrir perspectivas para prospecção de novos fármacos.